用冻干精子生产ICSI小鼠

前期研究中，我们采用小鼠卵母细胞胞浆内精子注射（ICSI）技术，成功地用新鲜精子获得了生理健康的ICSI小鼠。在此基础上，本文结合细胞冻干技术，进行了冻干精子ICSI生产试管小鼠的尝试。B6D2F1成年公鼠的精子在Tris-HCl-EDTA（pH8.2）溶液中冻干4 h后解冻，将其精子头注入到KM小鼠成熟卵母细胞的胞质中。6 h后，83.0%的卵子受精。用CZB溶液体外培养发现，冻干精子生产的胚胎，体外发育至2-C (92.0% vs 99.5%)、4-C（52.7% vs 97.2%）、桑椹胚（36.6% vs 86.3%）和囊胚的比例（21.4% vs 68.7%）极显著地（p<0.01）低于新鲜精子生产的ICSI胚胎。移植2-C期冻干精子ICSI胚胎检测体内发育，结果发现，D10的着床率为63.0%（17/27）；胎鼠的出生比例为21.7%（13/60），这些ICSI小鼠成年后的生理和生殖能力正常。试验结果说明，精子冻干后，仍能生产ICSI动物，冻干技术可以用于哺乳动物精子的保存。     

牛精子体外获能前后元素变化的研究

 本文应用x射线能谱技术，对获能前后精子质膜表面（头部、中段）和内部（顶体内、中段线粒体内）的元素进行了分析测试。结果表明，牛精子用肝素+咖啡因体外获能后，头部、中段质膜表面的Na、Al、S、K含量升高，Cl、Ca含量降低；顶体内Na、Mg、Si、P和Fe含量降低，而Ca、K、Cl和S含量升高；精子中段线粒体内Na、P、Si、Cl和Ca升高，而Mg、S、K和Fe却降低。获能过程中精子顶体内Na/Ca、Na/K、Cl/Ca、Cl/K和Na/Cl的浓度比分别为42.13、12.43、15.36、45.31和2.74；而摩尔比又分别为73.42、21.13、17.37、4.99和4.23。本文并对可能的获能机理进行了讨论。     

葡萄双受精过程的形态学观察

观察了葡萄双受精过程中雌雄性核的融合。结果表明:花粉管通过珠孔穿入退化助细胞,释放出二精子;精子核接近并贴附在卵核和次生核上,二者核膜融合,精核沉入卵核及次生核,染色质松解,并与雌性核染色质融合,出现雄性核仁,两性核仁融合,形成合子及初生胚乳核。卵核完成受精较次生核晚。受精属有丝分裂前型。精核进入卵核前看到了它的核仁。少数胚囊具有两套卵器。     

家兔精子体外获能与体外受精试验

本试验目的在于建立一种简便而有效的系统,能使家兔射出的精子完成体外获能,并获得体外受精、早期卵裂和正常产仔。精子体外获能采用三种方法:A.HIS(15min)+DM(1～2h);B.HIS(15min)+DM(11～12h);C.m-HIS(15min)+m-DM(2～4h)。经上述方法处理的精子与512枚输卵管卵母细胞进行体外受精和体外培养的结果表明,A组的受精和早期卵裂发育延迟;B组的受精卵大都停留在原核期;C组的受精和早期卵裂发育正常。将C组60枚2-4细胞移植至9只受体兔,5只妊娠,其中2只产4只试管仔兔,另外3只获得12个胎儿。     

哺乳动物性别控制的研究进展

性别控制是一项能显著提高养殖业经济效益的生物工程技术。目前哺乳动物的性别控制的方法很多,主要是通过XY精子分离和早期胚胎性别鉴定来实现。在生产中,还经常采用其它性别控制的方法,如:受精时间控制法、阴道pH值调节法和营养调节法等。就性别决定的机理、XY精子分离以及早期胚胎性别鉴定的几种方法进行了综述,并对性别控制存在的问题及发展前景进行了讨论。     

流式细胞仪在猪性别控制中的应用初探

在国内首次报道使用流式细胞仪对猪进行性别控制研究。猪精液通过流式细胞仪进行X、Y精子分离,分离精子经过数小时保存后,用于陆川母猪输卵管授精,最后产出健康仔猪。试验结果表明:①第1次(2005-10-14)精子分离的纯度为:X88%、Y83%;活力为X35%、Y21%。第2次(2006-01-13)纯度为:X70%,Y68%;活力为:X52%,Y36%。②该试验中母猪受孕率为25%,未受孕者仍然可在生产条件下继续繁殖。③受孕母猪(1头)产出健康仔猪5头,出生成活率100%,大小均匀,活力良好,哺乳期(28 d断奶)平均日增重与生产群极为接近(151.43 g1、48.93 g),但产活仔数低(生产群为8.4头/窝)。④仔猪雌性率为60%。试验结果初步表明:在该实验室现有条件下,使用流式细胞仪分离的X、Y精子,母猪通过输卵管受精可以产出健康仔猪;精子分离对仔猪哺乳期生长无明显影响;对性别比例有一定调控作用。     

单细胞电泳技术检测低温保存猪精子的DNA损伤

应用单细胞凝胶电泳技术(SCGE),对冷冻解冻后猪精子DNA的损伤情况进行研究.结果表明,冷冻解冻会对猪精子DNA造成损伤,其彗星率与鲜精相比差异显著(P＜0.05);各组冻精之间,甘油添加量为2%～3%(v/v)时,冷冻对猪精子DNA造成的损伤最低,彗星率均低于其余各组(P＜0.05).     

几种抗生素对波尔山羊精液低温保存的影响

研究了稀释液中庆大霉素、恩诺沙星、诺氟沙星、菌特灵新一代抗生素替代青、链霉素的添加对波尔山羊精液保存效果的影响。实验表明 ,恩诺沙星的保存效果优于其他抗生素 ,庆大霉素、诺氟沙星与青、链霉素效果相当 ,菌特灵最差。     

牛精子膜麦芽凝集素结合糖蛋白的分离与定位

牛精子膜用非离子去污剂 NP-40增溶,经固相凝集素亲和层析,初步分离了精子膜麦芽凝集素结合糖蛋白,经 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染色显示出了四条蛋白质带,分子量分别为78,60.42和33 kD。用分离到的糖蛋白制备抗血清,对牛精子进行免疫细胞化学标记,结果顶体区显示为强阳性,与麦芽凝集素亲和细胞化学的染色一致。用抗血清处理精子再进行亲和细胞化学染色时,顶体区的麦芽凝集素结合糖残基多数被封闭,揭示麦芽凝集素结合糖残基是构成抗原决定簇的成分。     

热应激对小鼠精子发生及其性能的影响

摘要 取24只小鼠分为慢性热应激组(EGⅠ)、急性热应激组(EGⅡ)和空白对照组(CG)。EGⅠ组每天早上移入40℃(相对湿度为53％～56％)的热应激箱内热应激10min,连续9d,到第10d,EGⅠ和EGⅡ同上热应激15min。结果显示:在热环境下,EGⅠ、EGⅡ组动物的肛温均比CG组高,EGⅡ组又比EGⅠ组高;3组动物睾丸重量及指数无明显变化;EGⅠ、EGⅡ两组动物精子数量及活动率均比CG组明显低(P<0.01);畸形率比CG组均高,EGⅠ组的精子数量、活动率显著低于EGⅡ组,畸形率极显著地高于EGⅡ组(P<0.01);在畸形的精子中,CG组主要以头部缺失为主,而EGⅠ组却以尾部缺失为主,EGⅡ组头部、尾部缺失相近。结果表明:热应激对精子的发生过程有毒性作用,抑制精子的形成,降低精子的数量及活动性能。